Silenciamiento de la fosfoglucosa isomerasa (PGI) en fibroblastos inmortalizados de ratón. Mediante la técnica del RNA de interferencia

Resumen

Se introdujo un fragmento de sh-RNA específico en un plásmido vector pSUPER-NeoGFP con el que se transformó un cultivo celular de fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs). El sh-RNA fue construido para la inhibición específica de la expresión celular de la  glucosa-6-fosfato isomerasa (PGIm). La glucosa-6-fosfato isomerasa es la segunda enzima de la glucolisis que cataliza la isomerización de glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato.

Un polímero catiónico de polietilen glicol fue utilizado como vehículo para transformar las células. Se transformaron dos cultivos celulares, uno usado como control transformado sólo con el plásmido vector y otro con el plásmido con el sh-RNA. La inhibición celular y el metabolismo fueron controlados con la medida de la producción de lactato como marcador de la eficiencia de la glucolisis. Y con una RT-PCR para cuantificar la expresión de la PGIm.

No se encontraron diferencias estadísticamente significativas en la producción de lactato entre ambos cultivos pero sí se observó una disminución de la expresión génica de la PGIm.